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Testbericht_04.05.2021

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Dartsch Scientific GmbH  Auf der Voßhardt 25  D-49419 Wagenfeld Auf der Voßhardt 25 D-49419 Wagenfeld, Germany Wassermatrix AG Blegistrasse 1 Fon: +49 5444 980 1322 Mobil: +49 151 2272 1294 CH- 6343 Rotkreuz, Schweiz Email: info@dartsch-scientific.com Web: www.dartsch-scientific.com

Mai 2021

TESTBERICHT Förderliche Wirkeffekte des Tesla Experimentier-Sets auf Zellebene

Hintergrund und Fragestellung Das Tesla Experimentier-Set der Firma Wassermatrix AG aus CH- 6343 Rotkreuz in der Schweiz wird auf der Homepage (www.wassermatrix.ch) so beschrieben, dass es über die Handsonde Wasser informieren bzw. strukturieren oder energetisieren kann. Das solcher- maßen energetisierte Wasser wird dann durch Trinken dem Körper zugeführt. Dadurch werden die körpereigenen Energiefelder aktiviert und die Selbstheilungskräfte werden an- gesprochen. In diesem Zusammenhang ist zu berücksichtigen, dass der Mensch – in Abhängigkeit vom Lebensalter – zu mindestens 70 % aus Wasser besteht, so dass auch die Möglichkeit zur direkten Energetisierung des Körperwassers möglich ist. Lt. Hersteller “berichten viele Nutzer von erstaunlichen Verbesserungen bei Vitalität, Gesundheit und Wohlbefinden”. In der vorliegenden Studie wurde mit aktuellen zellbiologischen Testverfahren untersucht, ob das Tesla Experimentier-Set in der Lage ist, ein Überangebot an endogen gebildeten Radikalen zu kompensieren und so einem oxidativen Stress mit einem verzögerten Hei- lungsprozess im Gewebe vorzubeugen. Ein solcher lokaler oxidativer Stress im Gewebe spielt beispielsweise bei Entzündungsreaktionen oder zellregenerativen Vorgängen nach Überbelastung eine wichtige Rolle. Es wurde ebenfalls untersucht, ob das Tesla Experi- mentier-Set einen direkten förderlichen Einfluss auf die Zellregeneration hat bzw. dieser Einfluss auch bei der Zugabe von energetisiertem Wasser erfolgt.

Versuchsaufbau Die Handsonde wurde außerhalb des Brutschrankes senkrecht mit dem grünen Antennen- stab nach unten in ein Tischstativ eingespannt. Behandelte Zellkulturen oder Reagenz- gläser aus Polypropylen mit dem zu informierenden Wasser wurden kreisförmig direkt um den Antennenstab plaziert (Abb. 1). Die entsprechenden Kontrollen befanden sich für die Zeit der Exposition in einem anderen Raum mindestens 10 m entfernt hinter mehreren Wänden. Die Exposition erfolgte bei Raumtemperatur. Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht Walsrode HRB 206302 Auf der Voßhardt 25 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 45/202/10932 D-49419 Wagenfeld, Germany Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Seite 2 von 6

Abb. 1: Versuchsaufbau für die Exposition von funktionalen Neutrophilen zur Untersu- chung der Bildung von endogenen Radikalen (linkes Bild), von Bindegewebsfibroblasten zur Untersuchung der Zellregeneration (mittleres Bild) und der Energetisierung von Kultur- medium für die Zellregeneration der Bindegewebsfibroblasten (rechtes Bild).

Endogene Radikalbildung bei funktionalen Neutrophilen Die hier dargestellten Untersuchungen wurden mit Promyelozyten der Zelllinie HL-60 (ACC-3; ECACC 98070106; Leibniz-Institut DSMZ, Braunschweig) durchgeführt. Die Zel- len wurden routinemäßig in RPMI 1640 mit 10 % Wachstumsgemisch und 0,5 % Genta- mycin kultiviert und in einem Brutschrank bei 37 °C und einer Atmosphäre aus 5 % CO2 und 95 % Luft sowie nahezu 100%iger Luftfeuchtigkeit inkubiert. Routinemäßig wurden die nicht adhärent wachsenden Zellen in Suspensionskulturen kulti- viert. Unter speziellen Kulturbedingungen mit 1,5 Vol% Dimethylsulfoxid wurden die Zellen innerhalb eines sechstägigen Zeitraumes zu sog. funktionalen Neutrophilen differenziert. Dies sind Zellen, welche zwar primär für die Abwehr von eingedrungenen Fremdkeimen im Blut zuständig sind, aber auch aus dem Blut in ein vorgeschädigtes und entzündetes Ge- webeareal einwandern und dort durch die Bildung von Superoxidanion-Radikalen eine wei- tere Zerstörung des Gewebes induzieren und so einen Heilerfolg verzögern können. Die Untersuchung der endogenen Radikalbildung nach Stimulation wurde bei funktionalen Neutrophilen nach einer einmaligen Behandlung mit den Frequenzen des Tesla Experi- mentier-Sets einen Tag vor dem eigentlichen Test für t = 0 (unbehandelte Kontrolle), 5, 15 und 30 min durchgeführt. Die funktionalen Neutrophilen wurden nach Zentrifugation und mehrmaligem Waschen in Phosphatpuffer durch Zugabe eines Phorbolesters in einem Reaktionsgemisch dazu angeregt, Superoxidanion-Radikale zu bilden. Die Radikale führten dabei zu einer Spaltung eines ebenfalls dem Versuchsansatz zuge- setzten Tetrazoliumfarbstoffes WST-1 (Sigma-Aldrich, Deisenhofen). Dabei war die Menge der gebildeten Sauerstoffradikale direkt proportional zur Farbstoffspaltung, d. h. je mehr

Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht Walsrode HRB 206302 Auf der Voßhardt 25 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 45/202/10932 D-49419 Wagenfeld, Germany Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Seite 3 von 6

reaktive Radikale vorhanden waren, desto stärker war die Farbstoffspaltung und damit auch die Änderung der optischen Dichte (= Farbe). Wurden die von den Zellen gebildeten Radikale durch den Wirkstoff inaktiviert, so veränderte sich die optische Dichte weniger stark. Die Änderung der optischen Dichte wurde als Differenzmessung ∆OD = 450 – 690 nm zu definierten Zeitpunkten bis 40 min mit einem Elisareader (BioTEK Elx 808 mit Soft- ware Gen 5 Version 3.00) gemessen und mit Microsoft Excel ausgewertet. Es wurden drei unabhängige Versuche (n = 3) mit Duplikaten durchgeführt. Die statistische Analyse der Versuchsergebnisse wurde mit dem parameterfreien zweiseitigen Wilcoxon- Mann-Whitney-Test vorgenommen. Ergebnis: Wie in Abb. 2 dargestellt, bewirkte eine zunehmende Expositionszeit mit dem Tesla Experimentier-Set eine abnehmende Bildung der endogenen Radikale. Selbst nach einer kurzen Expositionszeit von nur 5 min kam es bereits zu einer Abnahme der Radikal- bildung um 11,2 ± 5,5 % (Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwertes) im Vergleich zur unbehandelten Kontrolle; die verminderte Radikalbildung betrug bei 30 min Einwirkungs- zeit des Tesla Experimentier-Sets sogar 37,7 ± 7,7 % (Mittelwert ± Standardfehler des Mit- telwertes) im Vergleich zur unbehandelten Kontrolle. Diese Hemmung der Radikalbildung durch das Tesla Experimentier-Set war für Expositionszeiten ≥ 15 min statistisch hochsig- nifikant (p ≤ 0,01).

Abb. 2: Darstellung der endogenen Radikalbildung in Abhängigkeit von der Expositions- zeit der Zellkulturen mit dem Tesla Experimentier-Set. Die abnehmende Radikalbildung mit zunehmender Expositionszeit ist deutlich erkennbar und für Expositionszeiten ≥ 15 min statistisch hochsignifikant (p ≤ 0,01; Wilcoxon-Mann-Whitney-Test). Die unbehandelte Kontrolle wurde gleich „100 %“ gesetzt. Angegeben ist der Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwertes von drei unabhängigen Versuchen mit Duplikaten. Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht Walsrode HRB 206302 Auf der Voßhardt 25 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 45/202/10932 D-49419 Wagenfeld, Germany Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Seite 4 von 6

Zellregeneration bei Bindegewebsfibroblasten Die Untersuchungen wurden mit Bindegewebsfibroblasten (Zelllinie L-929, ACC-2, Leibniz Institut DSMZ, Braunschweig) durchgeführt. Die Zellen wurden routinemäßig in RPMI 1640 mit 10 % Wachstumsgemisch und 0,5 % Gentamycin in einem Begasungsbrutschrank bei 37 °C in einer Atmospäre aus 5 % CO2 und 95 % Luft bei annähernd 100%iger Luftfeuch- tigkeit kultiviert. Die Bindegewebsfibroblasten wurden in einer Dichte von 100.000 Zellen/ml in die vier Kompartimente eines Silikonrahmens (4 well-culture inserts; ibidi, Gräfelfing) ausgesät. Die einzelnen Kompartimente sind durch einen 500 µm dicken Silikonsteg voneinander ge- trennt. Wegen des speziellen Adhäsionsbereiches des Silikonrahmens haftet dieser fest auf dem Boden einer Kulturschale und bildet so einen zellfreien Raum, den die Zellen nach dem Entfernen des Rahmens durch Teilung und Wanderung neu besiedeln können. Nach Erreichen der Konfluenz (= Zellen liegen dicht and dicht) innerhalb von 48 Stunden nach der Zellaussaat wurden die Silikonrahmen mit einer Pinzette vorsichtig entfernt. So wurde ein scharfer Zellrand zwischen den vier Kompartimenten des Rahmens erhalten. Direkt nach dem Entfernen des Silikonrahmens wurden die Zellkulturen einmalig für t = 0 (unbehandelte Kontrolle), 5, 15 und 30 min den Frequenzen des Tesla Experimentier-Sets ausgesetzt und danach im Brutschrank weiter inkubiert. In einer weiteren Versuchsreihe wurden nicht die Zellen, sondern nur das wässrige Kulturmedium für t = 0 (unbehandeltes Kontrollmedium), 5, 15 und 30 min den Frequenzen des Tesla Experimentier-Sets ausge- setzt und danach zu den Zellen pipettiert, welche dann ebenfalls im Brutschrank weiter in- kubiert wurden. Es wurde durch mehrfaches Einwickeln in Aluminiumfolie und möglichst weit voneinander entferntes Aufstellen im Brutschrank darauf geachtet, dass zwischen den unterschiedlich behandelten Kulturen keine gegenseitige Beeinflussung stattfinden konnte. Nach der weiteren Inkubation im Brutschrank für 20 Stunden wurden die Zellen mit Phos- phatpuffer gewaschen, mit Methanol p.a. fixiert, mit Giemsa-Methylenblau-Lösung gefärbt, luftgetrocknet und die Breite des noch verbliebenen zellfreien Bereiches am Mikroskop an mindestens 12 Stellen ausgemessen. Insgesamt wurden drei unabhängige Versuchsrei- hen (n = 3) durchgeführt. Es wurde die relative Zellregeneration im Vergleich zur unbehan- delten Kontrolle berechnet. Die statistische Analyse der Versuchsergebnisse wurde mit dem parameterfreien zweiseitigen Wilcoxon-Mann-Whitney-Test vorgenommen. Ergebnis: Bereits die morphologische Auswertung der Zellregeneration zeigte eine deutli- che Verbesserung der Besiedlung des zellfreien Raumes durch die einmalige Exposition mit dem Tesla Experimentier-Set (Abb. 3). Dabei machte es keinen Unterschied, ob die Zellen mit dem Kulturmedium oder nur allein das Kulturmedium energetisiert worden war. Die maximale Förderung der Zellregeneration im Vergleich zur unbehandelten Kontrolle wurde nach der 30minütiger Expositionszeit gemessen und lag bei annähernd 25 % im Vergleich zur unbehandelten Kontrolle (Abb. 4). Die Förderung war für Expositionszeiten ≥ 15 min hochsignifikant (p ≤ 0,01).

Abb. 3: Mikroskopische Darstellung der förderlichen Wirkung des Tesla Experimentier- Sets nach 30 min Expositionszeit auf die Zellregeneration kultivierter Bindegewebsfibrob- lasten. (A) Unbehandelte Kontrolle. (B) Effekt nach Exposition von Zellen und Kulturme- dium. (C) Effekt nach Exposition nur allein vom Kulturmedium. Fixierte und angefärbte Prä- parate im Olympus IX-50 mit 10x Planachromat und Olympus E-10 bei 4 Megapixeln Auf- lösung im Durchlicht-Hellfeld-Verfahren.

Abb. 4: Wirkung des Tesla Experimentier-Sets auf die Regeneration von Bindegewebs- fibroblasten. Die Stimulierung der Zellregeneration mit zunehmender Expositionszeit ist deutlich erkennbar und für Expositionszeiten ≥ 15 min statistisch hochsignifikant (p ≤ 0,01; Wilcoxon-Mann-Whitney-Test). Die unbehandelte Kontrolle wurde gleich „100 %“ gesetzt. Angegeben ist der Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwertes von drei unabhängigen Versuchen. Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht Walsrode HRB 206302 Auf der Voßhardt 25 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 45/202/10932 D-49419 Wagenfeld, Germany Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Seite 6 von 6

Zusammenfassung und Schlussfolgerungen In den hier durchgeführten tierversuchsfreien Untersuchungen mit kultivierten organspezifi- schen Zellen hat das Tesla Experimentier-Set der Firma Wassermatrix AG seine förderli- chen Eigenschaften auf Zellebene bei nur einer einmaligen Anwendung zeigen können. In den durchgeführten Untersuchungen war es in der Lage, endogen gebildete Radikale zur Vermeidung von oxidativem Stress im Gewebe zu reduzieren sowie die Regeneration von Bindegewebsfibroblasten zu stimulieren. Die Verwendung des Produktes kann daher zur Steigerung der Vitalität und des Wohlbefindens bestens empfohlen werden.

Prof. Dr. Peter C. Dartsch Diplom-Biochemiker